Chromatography process

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI


KCKT / HPLC
(KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI / HIGH PERFOMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY)

KCKT adalah suatu teknik kromatografi yang menggunakan fasa gerak cair, dapat digunakan untuk pemisahan sekaligus untuk analisis

Berdasarkan kekuatan / kepolaran fasa geraknya KCKT dibagi menjadi:
- Fasa normal : Fasa gerak kurang polar dibandingkan fasa diam
- Fasa Terbalik : Fasa gerak lebih polar dibandingkan fasa diam

Prinsip Pemisaan :
- Pebedaan distribusi komponen diantara fasa diam dan fasa gerak
Semakin lama terdistribusi dalam fasa diam semakin lama waktu retensinya

Proses Elusi :
- Isokratik : Proses elusi yang eluennya menggunakan perbandingan komponen yang tetap dari awal sampai dengan akhir pemeriksaan
- Gradien : Proses elusi yang eluennya menggunakan perbandingan komponen yang diubah-ubah secara bertahap selama analisa

Bagian-bagian alat HPLC :
- Tempat Eluen. Botol yang tidak bereaksi dengan pelarut, dilengkapi penyaring. Eluen harus disaring dengan saringan membran
- Pompa, terbuat dari stainlessteel, seal terbuat dari grafit atau teflón, tekanan sampai 400 bar, memberikan laja alir sampai 5 ml/menit. Tak memberikan pulsa dan keberulangan pemompaan <1%
- Injektor
Dapat memasukkan sampel ke dalam kolom dalam bentuk sesempit mungkin
Mudah digunakan
Keberulangn tinggi
Dapat bekerja walaupun ada tekanan balik

- Kolom Yang Baik :
Kolom kuat dan tidak mudah berkarat
Pertikel isi kolom berdiameter Cecil dan seragam, bulat dan berpori
Efisiensi tinggi
Tahan terhadap tekanan tinggi
Menghasilkan puncak simetri dan sempit

- Jenis Kolom :
Kolom polar
Kolom non polar

- Syarat Detektor :
Tahan noise dan drift rendah
Sensitivitas tinggi
Respon cepat
Tidak sensitif terhadap perubahan pelarut
Mudah pengoperasiannya dan tahan lama

- Jenis Detektor Dalam KCKT :
Detector spektrofotometri
Detector elektrokimia
Detektor flouresensi
Detector Indeksrefraksi

- Pemeliharan Kolom :
Saring eluen dengan saringan membran
Hindari pengaliran eluen dari arah sebaliknya
Gunakan kolom penagman
Simpan kolom pada pelarut yang sesuai
Cuci kolom sesudah digunakan

tanaman obat